Serologiska tester: typer, användning

Laboratoriediagnos av praktiskt taget alla smittsamma sjukdomar är baserad på detekteringen av blod i patientens antikroppar, som produceras av patogent antigen, serologiska metoder. De gick in i medicinsk praxis i slutet av arton - början av nittonhundratalet.

Utvecklingen av vetenskapen har bidragit till att definiera antigena strukturen av mikrober och kemiska formler deras toxiner. Det är möjligt att skapa inte bara terapeutiska utan också diagnostisk serum. De erhålls genom att administrera försvagade patogener försöksdjur. Efter flera dagars blötläggning blod kaniner eller möss framställda produkter som används för identifiering av bakterier eller deras toxiner med hjälp av serologiska tester.

Den yttre manifestation av denna reaktion beror på villkoren för dess sammansättning och tillståndet av antigener i patientens blod. Om mikrober är olösliga partiklar, de sätter sig, lyseras, immobiliserat eller bundet i serum. Om antigenerna är lösliga, verkar det fenomenet neutralisering eller nederbörd.

agglutination (PA)

Serologiska agglutinationsprovet är mycket specifik. Det är lätt att utföra och är helt klart att snabbt upptäcka närvaron av antigener i patientserum. Det används för att ställa Vidal reaktion (diagnos av tyfus och paratyfoid) och Weigl (tyfus).

Det är baserat på en specifik interaktion mellan mänskliga antikroppar (eller agglutininer) och mikrobiella celler (agglyutenogenami). Efter deras interaktion är formade partiklar som faller ut. Detta är ett positivt tecken. För inställning reaktionen kan användas levande eller döda mikrobiella medel, svampar, protozoer, blodceller och somatiska celler.

Kemisk reaktion är uppdelad i två steg:

1. Specifika antikroppar föreningen (AT) med antigener (Ag).
2. Icke-specifik - avsättning av konglomerat AG-AT, dvs bildandet av agglutinat.

Reaktion indirekt agglutination (TPHA)

Denna reaktion är känsligare än den tidigare. Det används för diagnos av sjukdomar som orsakas av bakterier, intracellulära parasiter, protozoer. Det är så specifik som kan upptäcka även mycket låga koncentrationer av antikroppar.

För sin formulering med hjälp av renat får röda blodkroppar och röda blodceller från människa förbehandlats med antikroppar eller antigener (det beror på vad lab vill hitta). I vissa fall, humana röda blodkroppar behandlade med immunoglobuliner. Serologiskt svar av erytrocyter anses giltig om utfällning därav inträffade i botten av röret. Den positiva reaktionen vi kan säga när cellerna är anordnade i form av en inverterad paraply, som upptar hela botten. Den negativa reaktionen registreras när de röda blodkropparna sedimentera i form av en kolonn eller knappar i mitten av bottnen.

fällningsreaktion (RP)

Serologiska reaktioner av denna typ tjänar till att identifiera extremt små partiklar antigener. Detta kan vara, till exempel, proteiner (eller delar därav), föreningar av proteiner med lipider eller kolhydrater, en del av de bakterier och deras toxiner.

Sera för reaktionen erhålles genom artificiell angrepp av djur, typiskt kaniner. I denna metod kan du få absolut någon fällnings serum. Staging serologiska nederbörd liknande verkningsmekanism på agglutination. Antikropparna som finns i serumet binder till antigener i kolloidal lösning att bilda stora proteinmolekyler, som avsätts på botten av röret eller på substratet (gel). Denna metod anses vara mycket specifik och kan upptäcka även spårmängder av ämnet.

Används för att diagnostisera pest, tularemi, mjältbrand, hjärnhinneinflammation och andra sjukdomar. Också involverad i den rättsmedicinska undersökningen.

Gel Utfällningstest

Serologiska tester kan genomföras inte bara i ett flytande medium, men i agarosgelen. Detta kallas diffus fällningsmetoden. Med den studera sammansättningen av komplexa antigena blandningar. Denna metod är baserad på kemotaxi av antigener till antikroppar, och vice versa. Gelén de rör sig mot varandra med olika hastigheter och möte för att bilda fällningslinjer. Varje rad - en uppsättning av K-AT.

Neutralisation exotoxin antitoxin (RN)

Antitoxisk serum kan neutralisera exotoxin som mikroorganismer producerar. Baserat på dessa data och serologiska tester. Mikrobiologi använder denna metod för titrering av sera, toxiner och toxoider, liksom deras terapeutiska aktivitet. Styrkan av neutralisering av toxinet bestäms av de konventionella enheter - AE.

Dessutom, på grund av att denna reaktion kan bestämma de arter eller typer som tillhör exotoxin. Det används vid diagnos av stelkramp, difteri, botulism. Undersökningen kan utföras "på glaset", och i en gel.

lys reaktion (RL)

Immunserum, som kommer in i kroppen hos patienten, har, bortsett från dess huvudsakliga funktion av passiv immunitet, jämn och lytiska egenskaper. Den har förmåga att lösa upp mikrobiella medel, cellulära och främmande element virus kommer in i patientens kropp. Beroende på specificiteten hos antikropparna som ingår i de serum isolerade bactericidin, cytolysiner, spirohetoliziny, hemolysiner och andra.

Dessa specifika antikroppar kallas "komplement". Det finns i nästan alla kroppsvätskor, den har en komplex proteinstruktur och är mycket känslig för temperaturökning, skakades, syror och direkt solljus. Men i torkat tillstånd kan bibehålla sin lytiska egenskaper på upp till sex månader.

Det finns vissa typer av serologiska tester av denna typ:

- bakteriolys;

- hemolys.

Bakteriolys utförs med hjälp av patientens blodserum och specifik immunserum med levande bakterier. Om, då forskaren ser lys av bakterierna, och svaret kommer att betraktas som ett tillräckligt antal positiva komplement är närvarande i blodet.

Den andra blod serologiska svaret är att suspensionen av erytrocyter behandlade patientseruminnehållande hemolysiner, vilka aktiveras endast i närvaro av en speciell komplimang. Om det finns en, då labbet tittar på upplösningen av röda blodkroppar. Denna reaktion används ofta i moderna medicinen för att bestämma titern av komplement (dvs dess minsta mängd provocera lys av röda blodkroppar) i blodserum och för produktion av komplementbindningsanalys. Det var på detta sätt genomfördes serologiska reaktion för syfilis - Wasserman.

komplementfixering (RSK)

Denna reaktion används för att detektera serumantikroppar till patienten av ett smittämne och för att identifiera avsändaren av dess antigena struktur.

Fram till denna punkt har vi beskrivit en enkel serologiska tester. RAC anses svår reaktion, eftersom den interagerar inte två, utan tre element: en antikropp, ett antigen och komplement. Dess väsen ligger i det faktum att interaktionen mellan antikroppen och antigenet förekommer endast i närvaro av proteiner kompletterar vilka adsorberas på ytan av det bildade komplexet K-AT.

Själva antigener efter tillsats av komplement, genomgå betydande förändringar, som indikerar kvaliteten på reaktionen. Detta kan vara lys, hemolys, immobilisering, bakteriedödande eller bakteriostatisk effekt.

Själva reaktionen sker i två faser:

1. Bildningen av antikropp-antigen, vilket inte är visuellt märkbar forskaren.
2. Ändra antigen under inverkan av komplement. Denna fas vanligtvis kan spåras för blotta ögat. Om den visuella svaret inte är synlig, använd sedan ytterligare indikatorsystem som gör det möjligt att upptäcka förändringar.

indikatorsystem

Denna reaktion är baserad på bindningen av komplement. Det provrör timme efter inställning RSK sattes renade fårerytrocyter och serum hemolytisk inte innehållande komplement. Om röret var kvar obunden komplement, kommer det att gå med i komplex N-AT bildas mellan fåren blodceller och hemolysin, och orsaka deras upplösning. Detta skulle innebära att DGC är negativ. Om röda blodkroppar förblev intakt, då, i enlighet därmed, är reaktionen positiv.

hemagglutinering (RHA)

Det finns två fundamentalt olika hemagglutination. En av dem - serologiska, används för att bestämma blodgrupper. I detta fall erytrocyter interagerar med antikroppar.

Och den andra reaktionen är inte relaterad till serologisk, eftersom röda blodkroppar reagerar med hemagglutinin produceras av virus. Eftersom varje impulsgivare fungerar endast på vissa erytrocyter (kyckling, får, apa), kan vi anta denna reaktion snävt specifika.

Klart positivt eller negativt svar, är det möjligt för lokalisering av blodceller i botten av röret. Om de figur liknar en inverterad paraply, sedan den önskade viruset är närvarande i patientens blod. Och om alla de röda blodkropparna som bildas som ett mynt kolumner finns det inga okända patogener.

Reaktion av hemagglutinering inhibition (HAI)

Denna mycket specifik reaktion, som gör det möjligt att fastställa formen, typen av virus eller närvaron av specifika antikroppar i serum hos patientens blod.

Dess väsen ligger i det faktum att antikropparna sätts till rör innehållande testmaterialet, förhindrar avsättning av antigener på erytrocyter, därigenom stoppa hemagglutination. Detta är en kvalitativ indikation på närvaro av specifika antigener i blodet till en viss önskad virus.

Reaktions immunofluorescens (RIF)

Reaktionen är baserad på förmågan att identifiera komplex med AT-AH fluorescensmikroskopi efter behandling flyuorohromnymi färgämnen. Denna metod är enkel att använda, inte kräver isolering av renkultur och tar lite tid. Det är nödvändigt för snabb diagnos av infektionssjukdomar.

I praktiken är dessa serologiska tester delas in i två kategorier: direkta och indirekta.

Direkt RIF producerade antigen som tidigare behandlade fluorescerande serum. Och indirekt är att läkemedlet först behandlas med konventionell diagnosticum innefattande antikroppar mot den önskade antigenen och sedan åter anbringas fluorescerande vassle, som är specifik för proteinerna av komplexet K-AT, och mikrobiella celler blir synliga genom mikroskopi.